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赭曲霉毒素A的HPLC檢測(cè)方案

赭曲霉毒素由曲霉菌,如赭曲霉、硫色曲霉、蜂蜜曲霉以及綠青霉等產(chǎn)生的一類毒素。包括7種結(jié)構(gòu)類似的化合物,結(jié)構(gòu)通式:R1=Cl或H;R2=H、CH3或C2H5。其中赭曲霉毒素A(R1=C1,R2=H)毒性最大,在霉變谷物、飼料等最常見。

赭曲霉毒素A是一種無色結(jié)晶化合物??扇苡跇O性有機(jī)溶劑和稀碳酸氫鈉溶液。微溶于水。其苯溶劑化物熔點(diǎn)94~96℃,二甲苯中結(jié)晶熔點(diǎn)169℃。有光學(xué)活性[α]D-118°。其紫外吸收光譜隨pH值和溶劑極性不同而有別,在乙醇溶液中最大吸收波長(zhǎng)為213nm和332nm。有很高的化學(xué)穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性。

赭曲霉毒素A是由多種生長(zhǎng)在糧食(小麥、玉米、大麥、燕麥、黑麥、大米和黍類等)、花生、蔬菜(豆類)等農(nóng)作物上的曲霉和青霉產(chǎn)生的。動(dòng)物攝入了霉變的飼料后,這種毒素也可能出現(xiàn)在豬和母雞等的肉中。赭曲霉毒素主要侵害動(dòng)物肝臟與腎臟。這種毒素主要是引起腎臟損傷,大量的毒素也可能引起動(dòng)物的腸黏膜炎癥和壞死。還在動(dòng)物試驗(yàn)中觀察到它的致畸作用。

樣品處理過程

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:準(zhǔn)確稱取一定量標(biāo)準(zhǔn)品,用甲醇+乙腈(1+1)溶解,配成0.1mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)液。標(biāo)準(zhǔn)工作液:根據(jù)使用需要準(zhǔn)確吸取一定量的赭曲霉毒素儲(chǔ)備液,用流動(dòng)相稀釋,分別配成相當(dāng)于1ng/ml、10ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)工作液。用0.45μm的有機(jī)系濾膜過濾,精密量取10μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖。

樣品處理:準(zhǔn)確稱取試樣50.0g(準(zhǔn)確到0.1g)于均質(zhì)器配置的攪拌杯中,加入5.0g氯化鈉,加入100mL甲醇+水(8+2)。將攪拌杯置于均質(zhì)器上,于20000r/min高速攪拌提取1min。提取液經(jīng)槽紋折疊濾紙過濾于干凈的燒杯中。準(zhǔn)確移取10.0mL濾液并加入40.0mL水稀釋,混合均勻,經(jīng)玻璃纖維濾紙直接過濾入10mL注射器。凈化過程略。

色譜條件

色譜柱: C18反相色譜柱, 4.6 mm*250 mm,粒度5 μm

流動(dòng)相:水+乙腈+冰乙酸=102+96+2

波長(zhǎng):λex333nm   λem460nm

流速:1.0mL/min

進(jìn)樣量:10μL

柱溫:30℃

色譜圖

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