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百事可樂被指使用致癌色素，據(jù)英國《金融時(shí)報(bào)》7月4日報(bào)道,美國監(jiān)督機(jī)構(gòu)——環(huán)境健康中心表示,在美國10個(gè)州購買的百事可樂含有4-甲基咪唑,這是一種與嚙齒動物肺癌腫瘤有關(guān)的化學(xué)物質(zhì)。目前國家風(fēng)險(xiǎn)評估中心正在對可樂焦糖色素含有的4-甲基咪唑是否會對人體產(chǎn)生影響進(jìn)行評估，我國還將修訂焦糖色素限量標(biāo)準(zhǔn)。據(jù)了解，在我國現(xiàn)行食品質(zhì)量國標(biāo)中，可樂中焦糖色素沒有限量標(biāo)準(zhǔn)，只規(guī)定按生產(chǎn)需要適量使用。

4-甲基咪唑源于生產(chǎn)飲料所用的焦糖色素中，焦糖色素與其他人工合成色素相比，具備價(jià)格價(jià)廉、安全無毒等優(yōu)點(diǎn)，被越來越廣泛地應(yīng)用于醬油、醋、可樂、冷飲等食品工業(yè)中。然而，因?yàn)榻固巧卦谥圃爝^程中往往要使用氨或銨鹽，這種物質(zhì)和其它原輔料發(fā)生反應(yīng)，生成附帶產(chǎn)物4-甲基咪唑。4-甲基咪唑?yàn)樯窠?jīng)毒，能引起驚厥。長期食用會導(dǎo)致動物長腫瘤，有可能會對人體造成致癌風(fēng)險(xiǎn)。而據(jù)英國《每日郵報(bào)》報(bào)道，美國一公益組織檢測全球多個(gè)國家的可口可樂中4-甲基咪唑的含量，發(fā)現(xiàn)美國355毫升可樂中4-甲基咪唑含量為4微克，中國為56微克,英國為135微克，巴西則高達(dá)267微克。

針對“可樂致癌”事件，賽智科技第一時(shí)間參考大量的文獻(xiàn)方法，利用賽智科技全新高性能的LC-10Tvp型高效液相色譜儀，經(jīng)實(shí)踐檢驗(yàn)可提供焦糖色素中4-甲基咪唑的HPLC檢測方案，得出的結(jié)果準(zhǔn)確可靠，檢出限好，方案僅供參考。

以下是高效液相色譜法對焦糖色素中的4-甲基咪唑的詳細(xì)檢測方法。

1、儀器與試劑

1.1儀器、設(shè)備

LC-10Tvp高效液相色譜儀

Vertex 色譜柱：150mm×4.6mm×5μm

分析天平

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀

分液漏斗250ml

振蕩器

針頭過濾器

微孔濾膜：0.45μm

1.2試劑

甲醇（色譜純）

無水乙醇

三氯甲烷

三氯甲烷-無水乙醇萃取液（80: 20)：移取80 mL的三氯甲烷及20 mL的無水乙醇混合均勻備用

碳酸鈉

碳酸鈉溶液（100 g/L )：準(zhǔn)確吸取碳酸鈉100 g于1 000 mL容量瓶中，用水定容至刻度

庚烷磺酸鈉

磷酸二氫鉀

磷酸

磷酸二氫鉀緩沖液（0.05mol/L）：稱取磷酸二氫鉀6.8g，庚烷磺酸鈉1g于1000ml容量瓶中，加水900ml，用稀磷酸調(diào)pH至3.5，用水定容至1000ml。 

4-甲基咪唑標(biāo)準(zhǔn)品：純度>99 %o

4-甲基咪唑標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：準(zhǔn)確稱取0. 1 000 g 4-甲基咪唑于100 mL的容量瓶中，用流動相溶解定容至刻度。4-甲基咪唑含量1. 0 mg/mL，作為貯備溶液。

2、試樣溶液的制備

準(zhǔn)確稱取3g樣品（精確至0. 001 g)，加15mL水溶解，移入250 mL分液漏斗中，加100 g/L碳酸鈉溶液15 mL，加三氯甲烷-無水乙醇萃取液60 mL，劇烈振搖5 min。靜置分層后，將有機(jī)相移入另一分液漏斗中，水相再按同樣方法萃取一次，合并有機(jī)相；用100 g/L碳酸鈉溶液洗滌提取液3次，每次30mL。然后將有機(jī)相通過無水硫酸鈉濾入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，50℃濃縮至近干，取下，以水溶解殘?jiān)⒍ㄈ葜?0ml，經(jīng)0.45μm微孔膜過濾后供HPLC分析。

3、色譜條件

色譜柱：C18, 4. 6 mmx250 mm，粒度5 μm

流動相：甲醇: 0. 05 mol/L磷酸二氫鉀緩沖液（(pH 3.5，含0. 1％庚烷磺酸鈉）=5: 95

波長：210nm

流速：1. 0 mL/min

4、樣品測定

標(biāo)準(zhǔn)曲線：將4-甲基咪唑標(biāo)準(zhǔn)溶液配置成一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液各10μL，進(jìn)行HPLC分析，然后以峰面積為縱坐標(biāo)，以4-甲基咪唑的含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

樣品測定：吸取10 μL試樣溶液進(jìn)行HPLC分析，測定其峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得測定液中4-甲基咪唑的含量。

5、色譜圖